蛋白质生物合成过程中的氨基酸排列走向。
N端是氨基，C端是羧基。
Dintzis等人用3H-亮氨酸作标记分析了兔网织红细胞无细胞体系中血红蛋白生物合成的过程来证明的。
血红蛋白中含有较多亮氨酸，其氨基酸序列为已知，合成反应在较低温度中进行，以降低合成速度。
在反应开始后的4至60分钟内，每隔一定时间取样分析。
将带有标记的蛋白质分离出来，用胰蛋白酶水解肽链，用纸层析法分离水解碎片并测定所含放射性强度。
从实验结果中发现，反应4分钟后，只有竣基端含有3H-亮氨酸。
随着反应时间的延长，带有标记的肽段自羧基向N端延伸，到60分钟时，几乎整个肽断都布满了标记物，这个实验说明多肽链的合成是从N端向C端进行的。
(1)将蛋白质样品与5X样品缓冲液(20ul+5ul)在一个eppendorf 管中混合。放入100℃加热5-10min，离心取上清点样。
(2)将玻璃板、样品梳、Spacer用洗涤剂洗净，用ddH2O冲洗数次，再用乙醇擦拭，晾干。
(3)组装好玻璃板：固定玻璃板时，两边用力一定要均匀，防止夹坏玻璃板。
(4)按表格1，根据要检测的蛋白的分子大小，选择相应的分离胶浓度，按表格2的配方进行配制。配制过程要迅速，催化剂TEMED要在注胶前再加入，否则凝结无法注胶。注胶过程最好一次性完成,避免产生气泡。
(5)向玻璃板间灌制分离胶，立即覆一层重蒸水，大约20 min后胶即可聚合。水封的目的是为了使分离胶上延平直，并排除气泡。 凝胶聚合好的标志是胶与水层之间形成清晰的界面。
(6)按表格3配制浓缩胶。
(7)将分离胶上层重蒸水倾去，滤纸吸干，灌制浓缩胶，插入样品梳。注意，样梳需一次平稳插入,梳口处不得有气泡,梳底需水平。
(8)装好电泳系统，加入电极缓冲液，将样品梳拔去，上样。上样前请确保锯齿孔内的气泡全部排出,否则会影响加样效果。另外，上样过程中注射器不可过低，以防刺破胶体，也不可过高，在样下沉时会发生扩散。 为避免边缘效应，最好选用中部的孔注样。
(9)稳压200V，溴酚蓝刚跑出分离胶时，停止电泳，约需45 min～1hr. 最后，小心的将胶剥离玻璃板，进行下一步实验。