因为酶切位点的那几个碱基通常是跟模板不匹配的，需要引入酶切点以匹配模板。
酶切位点（Restriction Enzyme cutting site）：DNA上一段碱基的特定序列，限制性内切酶能够识别出这个序列并在此将DNA序列切成两段。
可能存在同尾酶，不同酶的识别序列不同，有的可能能识别多个酶切位点，比如STY1识别序列有WW。
PCR和TCRADV3是两种不同的分子检测技术。PCR主要应用于DNA的检测，而TCRADV3则主要应用于T细胞受体（TCR）的检测。选择哪种技术要根据实验目的和样本类型进行考虑。
如果需要检测DNA序列，例如基因突变或人工合成的DNA，那么PCR是更为适合的选择。
如果需要检测T细胞对特定抗原的反应，那么TCRADV3则更为适合，因为它可以检测到T细胞的TCR序列并帮助了解它们的抗原特异性。因此，选择哪种技术要根据研究目的和实验需求来确定。
PCR扩增的引物一般从DNA的末端开始复制，一对引物的5'端氧基与3'端磷酸基匹配，可以使引物稳定地结合到DNA模板上，并在热循环过程中起到复制作用。
引物的设计应避免出现二硝基和三硝基等问题，对于G-C含量较高的序列引物设计应使GC含量尽量均衡。PCR扩增的引物选择对扩增效率和特异性都有重要的影响，正确选择合适的引物可以保证扩增结果的准确性和可重复性。