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考马斯亮蓝法测蛋白浓度,具体步骤有哪些,需要什么试剂
时间:2025-05-02 13:38:41
答案

试剂:

1.考马斯亮蓝试剂;

2.标准蛋白质溶液。

蛋白质含量的测定步骤

1.配制Bradford浓染液;

2.标准曲线蛋白质样本的准备:尽量使用与待测样本性质相近的蛋白质作为标准品,例如测定抗体,可用纯化的抗体作为标准,也可用抗体作为标准蛋白;

3.将待测样本溶于缓冲溶液中,该缓冲溶液应与制作标准曲线的缓冲溶液相同;

4.按1比5的比例用蒸馏水稀释浓染料结合溶液,如出现沉淀,过滤除去;

5.每个样本加5毫升稀释的染料结合溶液,染液与蛋白质结合后,将由红色变为蓝色,在595纳米波长下测定其吸光度;

6.根据标准曲线计算待测样本的浓度。

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