1.提取RNA与提取DNA方法的区别与联系,提RNA要用depc水,要避免RNA酶,要去DNA,抽提的时候用水饱和酚。
DNA用一般的水就可以了,其他的都不是很严格,不用去RNA,抽提的时候用酚氯仿。
2.RNA操作时要求比较严格,用具都要灭菌灭得很干净,戴手套操作,少说话以防把口水滴入实验样品。
DNA就不用那么麻烦,随便抽即可。
3.RNA比DNA脆弱。
RNA,即核糖核酸,存在于生物细胞以及部分病毒、类病毒中的遗传信息载体。
RNA由核糖核苷酸经磷酸二酯键缩合而成长链状分子。
一个核糖核苷酸分子由磷酸,核糖和碱基构成。
1.在提取缓冲液中加入10%CTAB。
CTAB(十六烷基三乙基溴化铵)是一种去污剂,可溶解细胞膜,它能与核酸形成复合物,在高盐溶液中(0.7 mol/L NaCl)是可溶的,当降低溶液盐浓度到一定程度(0.3 mol/L NaCl)时,从溶液中沉淀,通过离心就可将DNA与蛋白分开。
2.在使用蛋白酶K的基础上在使用20%的SDS。
SDS是阴离子去污剂,作为变性剂和助溶试剂,它能断裂分子内和分子间的氢键,使分子去折叠,破坏蛋白分子的二、三级结构,进而除去蛋白质。
3.使用氯仿/异戊醇抽提两次。
两次的效果要明显好于一次的,从而尽可能多的除去蛋白质。
用0.14摩尔每升的稀氯化钠溶液溶解,用1至2摩尔每升的浓氯化钠溶液提纯析出RNA。
在1至2摩尔每升的浓氯化钠溶液中,DNA核蛋白的溶解度很大,RNA核蛋白的溶解度很小;在0.14摩尔每升的稀氯化钠溶液中,DNA核蛋白的溶解度很小,RNA核蛋白的溶解度很大。
利用不同浓度的氯化钠溶液,将DNA核蛋白和RNA核蛋白从样品中分别抽提出来,将提取DNA中过程里的两次氯化钠溶液对调就行。