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PCR实验室有洁净度要求吗
时间:2025-06-19 20:42:43
答案

PCR实验室有洁净度要求,其要求如下:

1.PCR实验室净化要求四个区域的空调系统完全独立。

各个实验室环境因研究项目不同而有差异,标本制备区配备有B2型生物安全柜,需要在安全柜进行操作时,有相应数量的新风补充。

产物分析区配备有排风橱,需要有一定数量的新风补充。

2.实验室内的温度、湿度都有要求。

一般要求相对湿度在百分之六十五以下,南方湿度较大,标本制备区和产物分析区需要大量的新风补充。

3.PCR实验室都要求室内达到ISO7级洁净标准。

PCR基因扩增原理
答案

将待扩增的模板DNA变性使之成为单链,DNA样品中,特异性的引物能够与其互补的序列杂交,在脱氧核苷三磷酸和Taq酶存在时,就可以合成模板 DNA的互补链,反应完成后,将反应混合物加热使DNA双链变性,温度下降后,过量的引物又可以开始第二轮的合成反应。

这种延伸,变性,退火,延伸的循环可以重复多次,使所需要的DNA片段得到特异性的扩增。

PCR实验的原理和方法步骤是什么
答案

原理:碱基互补原则。

步骤

1.模板DNA的变性,模板DNA经加热至94摄氏度时,聚合酶链式反应间后,使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离,使之成为单链,以便它与引物结合。

2.为下轮反应作准备,模板DNA与引物的退火,模板DNA经加热变性成单链后,温度降至40到60摄氏度,引物与模板DNA单链的互补序列配对结合。

3.引物的延伸,DNA模板引物结合物在DNA聚合酶的作用下,于72摄氏度,以dNTP为反应原料,靶序列为模板,按碱基配对与半保留复制原理。

4.合成一条新的与模板DNA链互补的半保留复制链重复循环变性、退火、延伸三过程,就可获得更多的“半保留复制链”,而且这种新链又可成为下次循环的模板。

5.每完成一个循环需2到4分钟,2到3小时就能将待扩目的基因扩增放大几百万倍。

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