色谱法:又称层析法,是一种以分配平衡为机理的分配方法色谱。
主要分为吸附柱色谱、分配柱色谱两种;吸附柱色谱原理:在一定条件下,硅胶与被分离物质之间产生作用,这种作用主要是物理和化学作用两种。
物理作用来自于硅胶表表面与溶质分子之间的范德华力,化学作用主要是硅胶表面的硅羟基与待分离物质之间的氢键作用;色谱管为内径均匀、下端缩口的硬质玻璃管,下端用棉花或玻璃纤维塞住,管内装入吸附剂。
吸附剂的颗粒应尽可能保持大小均匀,以保证良好的分离效果;吸附剂的基本原理与吸附薄层色谱相同,也是基于各组分与吸附剂间存在的吸附强弱差异,通过使之在柱色谱上反复进行吸附、解吸、再吸附、再解吸的过程而完成的;不同的是,在进行柱色谱的过程中,混合样品一般是加在色谱柱的顶端,流动相从色谱柱顶端流经色谱柱,并不断地从柱中流出。
色谱法的原理是待分离物质分子在固定相和流动相之间分配平衡的过程,不同的物质在两相之间的分配会不同,这使其随流动相运动速度各不相同,随着流动相的运动,混合物中的不同组分在固定相上相互分离。
根据物质的分离机制,又可以分为吸附色谱、分配色谱、离子交换色谱、凝胶色谱、亲和色谱等类别。