参加PCR反应的物质原料主要有五种,包括:引物、酶、“dNTP”、模板DNA和缓冲液。
引物,是指一小段单链DNA或RNA,作为DNA复制的起始点。
在核酸合成反应时,它作为每个多核苷酸链进行延伸的出发点。
酶,是指具有生物催化功能的高分子物质。
在酶的催化反应体系中,反应物分子被称为底物,底物通过酶的催化而转化为另一种分子。
“dNTP”是“脱氧核糖核苷三磷酸”的缩写。
在生物DNA合成中,以及各种PCR技术中起原料作用。
模板DNA是一个DNA片段,它可以是单链分子、双链分子、线状分子和环状分子。
就模板DNA而言,影响PCR的主要因素是模板的数量和纯度。
当往某些溶液中加入一定量的酸和碱后,该混合溶液具有阻碍溶液pH变化的作用,这样的溶液叫做缓冲溶液。
PCR主要组分包括:引物、10X缓冲液、dNTP、模板和酶。
作用:
1.引物是与模板配对的碱基:起始PCR的合成部位。
2.其中10X缓冲液成分最为复杂,除水外一般包括四个有效成分:缓冲体系,使用HEPES或MOPS缓冲体系;一价阳离子,一般采用钾离子,但在特殊情况下也可使用铵根离子;二价阳离子,即镁离子,根据反应体系确定,除特殊情况外不需调整;辅助成分,常见的有DMSO、甘油等,主要用来保持酶的活性和帮助DNA解除缠绕结构。
3.dNTP是四种脱氧核苷酸,PCR扩增中用于合成DNA的原料。
4.模板是待扩增的DNA序列。
5.酶能够催化DNA序列的合成。
1.退火时间:一般是30秒,也有用15秒,退火需要根据引物不同而作改动;
2.退火是一种金属热处理工艺,指的是将金属缓慢加热到一定温度,保持足够时间,然后以适宜速度冷却;
3.目的是降低硬度,改善切削加工性;
4.消除残余应力,稳定尺寸,减少变形与裂纹倾向;
5.细化晶粒,调整组织,消除组织缺陷;
6.退火是一种对材料的热处理工艺,包括金属材料、非金属材料;
7.而且新材料的退火目的也与传统金属退火存在异同。