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PCR,常用荧光染料的化学结构是什么
时间:2025-06-15 10:42:39
答案

PCR常用荧光染料的化学结构是琼脂糖胶,或者是在跑完胶后对整个胶体用稀释液染色,在紫外光照射下散发出橘黄色的光,当与DNA结合后,发光量大大增强。

PCR又叫聚合酶链式反应,是一种用于放大扩增特定的DNA片段的分子生物学技术,它可看作是生物体外的特殊DNA复制,PCR的最大特点,是能将微量的DNA大幅增加

无论是化石中的古生物、历史人物的残骸,毛发皮肤或血液,只要能分离出一丁点的DNA,就能用PCR加以放大,进行比对,这也是“微量证据”的威力之所在,由1983年美国科学家首先提出设想,1985年由其发明了聚合酶链反应,即简易DNA扩增法,意味着PCR技术的真正诞生。

PCR,buffer,中镁离子的作用
答案

镁离子影响PCR的多个方面,如DNA聚合酶的活性,这会影响产量;再如引物退火,这会影响特异性。

dNTP和模板同镁离子结合,降低了酶活性所需要的游离镁离子的量。

最佳的镁离子浓度对于不同的引物对和模板都不同,但是包含200μM的dNTP的典型PCR起始浓度是

1.5mM。

在多数情况下,较高的游离镁离子浓度可以增加产量,但也会增加非特异性扩增,降低忠实性,当然,也有相反的报道。

为了确定最佳浓度,可以用0.1至5mmol/L的递增浓度的镁离子 进行预备实验,选出最适的镁离子浓度。

在PCR反应混合物中,应尽量减少有高浓度的带负电荷的基团,例如磷酸基团或EDTA等可能影响镁离子离子浓度的物质,以保证最适镁离子浓度。

PCR,进行的基本条件是什么
答案

PCR进行的基本条件为:

1.模板脱氧核糖核酸的变性。

模板脱氧核糖核酸经加热至九十三摄氏度一定时间后,使模板脱氧核糖核酸双链或经PCR扩增形成的双链脱氧核糖核酸解离,成为单链与引物结合;

2.模板脱氧核糖核酸与引物的退火。

模板脱氧核糖核酸经加热变性成单链后,温度降至五十五摄氏度左右,引物与模板脱氧核糖核酸单链的互补序列配对结合;

3.引物的延伸。

脱氧核糖核酸模板引物结合物在耐热脱氧核糖核酸聚合酶的作用下,以脱氧核糖核苷三磷酸为反应原料,靶序列为模板,按碱基配对与半保留复制原理,合成一条新的与模板脱氧核糖核酸链互补的半保留复制链。

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