常见的高保真酶有Pfu,Pfu Ultra,但是我用过最好用的高保真酶是Phusion.因为一般的高保真酶因为有外切酶的活性,虽然提高了保真度,但是扩增效率会降低,所以用Pfu的时候,往往需要扩增时间要比Taq酶长,Pfu Ultra好一些。
但是都难免会碰到Taq酶P有条带,换成高保真酶,直接P可能没有结果,或者是条带很弱。
Phusion最牛,保真度可能大概有Taq酶的50来倍,而且太强劲了,基本没有P不出来过。
PCR的用途有:
2.不对称PCR制备单链DNA用于DNA测序;
3.反向PCR测定未知DNA区域;
4.反转录PCR用于检测细胞中基因表达水平、RNA病毒量以及直接克隆特定基因的cDNA;
5.荧光定量PCR用于对PCR产物实时监控;
6.cDNA末端快速扩增技术;
7.检测基因的表达。
1.先用溶液溶解掉含有DNA的琼脂糖凝胶,然后将其加入到含有吸附柱的离心管中,使得吸附柱能够吸附住DNA。
然后再通过离心,将含有琼脂糖的溶液去除掉;
2.接下来加入去盐的漂洗液进一步去除杂质。
由于PH值的原因,DNA还是会被吸附在吸附柱上的膜上;
3.最后加入纯水或者TE溶解液,在这个条件下DNA会溶解在其中。
可以通过离心将液体分离下来,这样得到的液体就是纯化好的PCR产物。