蛋白质的沉淀,沉淀是溶液中的溶质由液相变成固相析出的过程。
蛋白质从溶液中析出的现象,称为蛋白质的沉淀。
蛋白质沉淀常用的方法有盐析、等电点沉淀、有机溶剂沉淀、生物碱试剂与某些酸沉淀等。
蛋白质沉淀的原因:
1.盐析,在蛋白质水溶液中,加入了高浓度的强电解质盐如硫酸铵、氯化钠、硫酸钠等而使蛋白质从溶液中析出,故而沉淀。
2.变性,当天然蛋白质受物理或化学因素影响后,失去原有的生物活性,并且物理化学性质均以改变的作用,导致分子中的次级键断裂,导致空间构象从紧密有序的变为松散无序的状态,因此产生沉淀。
蛋白质沉淀常用的方法有盐析、等电点沉淀、有机溶剂沉淀、生物碱试剂与某些酸沉淀等。
1.盐析:向某些蛋白质溶液中加入某些无机盐溶液后,可以降低蛋白质的溶解度,使蛋白质凝聚而从溶液中析出。
2.等电点沉淀:等电点沉淀法是利用蛋白质在PH值等于其等电点的溶液中溶解度下降的原理进行沉淀分级的方法。
3.有机溶剂沉淀:利用与水互溶的有机溶剂能使蛋白质在水中的溶解度显著降低而沉淀的方法,称为有机溶剂沉淀。
5.其他沉淀法非离子型聚合物、聚电解质和某些多价金属离子可用作蛋白质的沉淀剂。
1.蛋白质在洗脱时,当出现第一个洗脱峰后,洗脱液已经接近柱床表面,没有及时加入洗脱液曹成蛋白被洗脱下来的较少;
2.在补加洗脱液时,大量蛋白又继续被洗脱下来;
3.在层析柱发生倾斜、移动时,会出现双峰;
4.在把样品的顺序搞错时会出现双峰。